Plasmide CRISPR/Cas9 KO RBM47 (m): sc-434185

Présentation

Rbm47 code RBM47, une protéine liant l’ARN qui s’associe aux transcrits afin d’influencer la régulation post‑transcriptionnelle de l’expression génique, notamment la stabilité des ARNm, l’épissage et les résultats de l’édition de l’ARN. RBM47 a été associée à la voie d’édition de l’ARN cytidine‑vers‑uridine (C‑vers‑U) dépendante d’APOBEC1, contribuant à la diversification des transcrits dans des contextes épithéliaux et gastro‑intestinaux. En modulant des programmes de maturation de l’ARN, RBM47 peut affecter des décisions d’état cellulaire telles que la différenciation et l’intégrité épithéliale, avec des liens rapportés à des signatures d’expression génique dérégulées dans des contextes pertinents pour le cancer et l’inflammation. Dans les systèmes murins, la perturbation de Rbm47 offre une approche exploitable pour disséquer le contrôle, centré sur l’ARN, des réseaux de signalisation et de l’homéostasie tissulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RBM47 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Rbm47 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Rbm47, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Rbm47 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RBM47.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Rbm47 pour l'étude de la signalisation de RBM47, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Rbm47 essentiels à la fonction de RBM47
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Rbm47 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RBM47 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le RBM47 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Rbm47. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RBM47 plasmide HDR (m) et le RBM47 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Rbm47 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Rbm47 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.