Plásmido Doble Nickase (h) RASAL3: sc-404999-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)RASAL3 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa RASAL3 (h) y el plásmido de doble nickasa RASAL3 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a RASAL3. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) RASAL3 | sc-404999-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) RASAL3 | sc-404999-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RASAL3 codifica una proteína activadora de la actividad GTPasa de Ras que atenúa la señalización de Ras al acelerar la hidrólisis de GTP en pequeñas GTPasas de la familia Ras, limitando así la salida downstream de las vías MAPK/ERK y PI3K–AKT. En células del linaje inmunitario, RASAL3 participa en el ajuste fino de la señalización proximal al receptor de antígeno, influyendo en los umbrales de activación, la proliferación y los programas de diferenciación. Al modular respuestas transcripcionales y metabólicas dependientes de Ras, RASAL3 puede afectar las respuestas al estrés celular y las decisiones de supervivencia. El control desregulado de la vía de Ras es ampliamente relevante en contextos de disfunción inmunitaria y señalización oncogénica, lo que convierte a RASAL3 en un nodo útil para estudios mecanísticos de transducción de señales.
RASAL3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus RASAL3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de RASAL3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de RASAL3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con RASAL3 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.