Plásmido CRISPR de Activación (h) RANTES: sc-401806-ACT

CCL5 codifica la quimiocina RANTES, un ligando secretado de CCR1, CCR3 y CCR5 que coordina el reclutamiento, la adhesión y la activación de leucocitos durante las respuestas inflamatorias. La señalización de RANTES activa cascadas dependientes de GPCR que convergen con la quimiotaxis, la activación de integrinas, los flujos de calcio y las vías MAPK y PI3K aguas abajo, modulando el tráfico de células inmunitarias dentro de los tejidos. La expresión desregulada de CCL5 se asocia con microambientes inflamatorios crónicos y una vigilancia inmunitaria alterada, lo que la hace relevante para estudios de autoinmunidad, dinámicas inmunitarias asociadas a infecciones e interacciones tumor–sistema inmune. En sistemas humanos, CCL5/RANTES se investiga comúnmente en el contexto de la comunicación entre células mieloides y células T, redes de citocinas y la interacción recíproca entre estroma y sistema inmune.

RANTES El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CCL5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

RANTES El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CCL5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CCL5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de RANTES. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CCL5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de RANTES en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía RANTES en células tumorales con expresión de CCL5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.