Ran CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422594

Übersicht

Ran (Ras-related nuclear protein) ist eine konservierte kleine GTPase, die über die Kernhülle hinweg einen RanGTP/RanGDP-Gradienten aufbaut, um den gerichteten nukleozytoplasmatischen Transport über Importin-/Exportin-Wege anzutreiben. Über den Kernimport und -export hinaus reguliert Ran die Assemblierung der mitotischen Spindel, die Funktion der Zentrosomen und die Neubildung der Kernhülle und koppelt so Transportdynamiken an die Progression des Zellzyklus. Durch diese Funktionen beeinflusst Ran die transkriptionelle Regulation, die Genomstabilität und Stressantworten, die in proliferativen und neuroentwicklungsbedingten Störungen sowie in krebsassoziierten zellulären Phänotypen häufig gestört sind. In Mausmodellen wird Ran breit eingesetzt, um zentrale Mechanismen der Mitose und des nuklearen Transports zu untersuchen, die Differenzierung und Gewebehomöostase prägen.

Das Ran CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ran-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ran-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ran nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Ran-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ran-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Ran-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ran-Exone abzielen, die für die Ran-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ran-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Ran CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Ran CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ran-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Ran HDR-Plasmid (m) und Ran HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ran-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ran-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.