Plasmide Double Nickase (h) Rak: sc-405590-NIC

Le gène humain **FRK** code la tyrosine kinase non réceptrice **Rak**, une enzyme apparentée à la famille Src, enrichie dans les contextes épithéliaux, qui module la signalisation issue des récepteurs aux facteurs de croissance et des complexes d’adhésion cellule–cellule. Rak participe au contrôle, dépendant de la phosphorylation, de la dynamique du cytosquelette, de la progression du cycle cellulaire et des programmes de différenciation, via des voies qui croisent la signalisation EGFR/ErbB, la signalisation des adhésions focales et la régulation des jonctions. Des altérations de l’activité ou de l’expression de FRK ont été associées à une prolifération dérégulée et à des perturbations de l’homéostasie épithéliale, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la biologie tumorale, de l’invasion et de la signalisation spécifique de lignée. En tant que kinase aux effets dépendants du contexte sur la croissance et la motilité, Rak est fréquemment étudiée afin de cartographier les réseaux de phosphorylation et les mécanismes de rétrocontrôle dans la signalisation induite par le stress et par les récepteurs.

Rak Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FRK dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FRK. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FRK. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FRK.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.