Plásmido Doble Nickase (h) Rak: sc-405590-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Rak consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Rak (h) y el plásmido de doble nickasa Rak (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a FRK. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Rak Anticuerpo (H-12): sc-166478
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Rak | sc-405590-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Rak | sc-405590-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El FRK humano codifica la tirosina quinasa no receptora Rak, una enzima relacionada con la familia Src y enriquecida en contextos epiteliales que modula la señalización procedente de receptores de factores de crecimiento y de complejos de adhesión célula–célula. Rak participa en el control dependiente de fosforilación de la dinámica del citoesqueleto, la progresión del ciclo celular y los programas de diferenciación mediante vías que se entrecruzan con la señalización de EGFR/ErbB, la señalización de adhesiones focales y la regulación de las uniones celulares. Las alteraciones en la actividad o la expresión de FRK se han vinculado con una proliferación desregulada y con la homeostasis epitelial, lo que lo hace relevante para estudios de biología tumoral, invasión y señalización específica de linaje. Como quinasa con efectos dependientes del contexto sobre el crecimiento y la motilidad, Rak se investiga con frecuencia para cartografiar redes de fosforilación y el control por retroalimentación en condiciones de estrés y en la señalización impulsada por receptores.
Rak El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus FRK en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de FRK. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de FRK. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con FRK alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.