Rag C CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-424807

Übersicht

Rragc kodiert Rag C, eine lysosomale kleine GTPase, die mit RagA oder RagB ein Heterodimer bildet, um die intrazelluläre Aminosäureverfügbarkeit mit der Rekrutierung und Aktivierung von mTORC1 am Lysosom zu koppeln. Über Interaktionen mit dem Ragulator-Komplex und nachgeschalteten mTORC1-Effektoren trägt Rag C dazu bei, als Reaktion auf Nährstoffsignale die Proteinsynthese, Autophagie, Lysosomenbiogenese und metabolische Umprogrammierung zu regulieren. Eine fehlregulierte Rag-GTPase-Signalgebung kann Nährstoffsensorkontrollpunkte stören und wurde mit Phänotypen in Verbindung gebracht, die für die Proliferationskontrolle, die Funktion von Immunzellen und die zelluläre Anpassung an Stress relevant sind. In Mausmodellen unterstützt Rag C mechanistische Studien zum mTOR-getriebenen Wachstum sowie zum Gleichgewicht zwischen anabolen und katabolen Prozessen in Entwicklungs- und krankheitsrelevanten Kontexten.

Das Rag C CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Rragc-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Rragc-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Rragc nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Rag C-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Rragc-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Rag C-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Rragc-Exone abzielen, die für die Rag C-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Rragc-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Rag C CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Rag C CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Rragc-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Rag C HDR-Plasmid (m) und Rag C HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Rragc-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Rragc-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.