Plásmido Doble Nickase (h) Rac 1: sc-400175-NIC

RAC1 codifica Rac1, una pequeña GTPasa de la familia Rho que alterna entre un estado activo unido a GTP y un estado inactivo unido a GDP para coordinar la remodelación del citoesqueleto de actina, la formación de ondulaciones de membrana (membrane ruffling) y la polaridad celular. Rac1 transmite señales a través de efectores como las quinasas PAK, el complejo regulador WAVE y la NADPH oxidasa, integrando señales de receptores tirosina quinasas e integrinas para regular la migración, la adhesión, la endocitosis y la generación de especies reactivas de oxígeno. En biología humana, la actividad desregulada de RAC1 se vincula con dinámicas epitelio-mesenquimales alteradas, programas de invasión y el tráfico de células inmunitarias, y se ha asociado con la progresión del cáncer, trastornos del neurodesarrollo y fenotipos inflamatorios. Estas conexiones de vía convierten a RAC1 en un nodo ampliamente utilizado para investigar el control del citoesqueleto, la comunicación cruzada con MAPK y las transiciones de estado celular en estudios mecanísticos.

Rac 1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus RAC1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de RAC1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de RAC1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con RAC1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.