RABAPTIN-5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403303

Visão geral

RABEP1 codifica a RABAPTIN-5, um efetor de Rab5 que coordena o tráfego endocítico inicial ao promover eventos de ancoragem e fusão de vesículas em endossomos precoces. Por meio de interações com GTPases da família Rab5 e com a maquinaria de triagem endossomal, a RABAPTIN-5 ajuda a regular a internalização de receptores, as decisões entre reciclagem e degradação de cargas e a maturação dos endossomos. Esses processos influenciam a saída de sinalização de receptores de superfície e a renovação de proteínas de membrana, conectando a função de RABEP1 a vias que controlam a sinalização por fatores de crescimento, a captação de nutrientes e a homeostase de membrana. A desregulação do controle endocítico e do tráfego dependente de Rab5 tem sido associada a dinâmicas de sinalização alteradas e a fenótipos celulares observados na biologia do câncer e em modelos relevantes para neurodegeneração.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO RABAPTIN-5 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene RABEP1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do RABEP1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do RABEP1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína RABAPTIN-5.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de RABEP1 para a investigação da sinalização de RABAPTIN-5, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) RABEP1 críticos para a função RABAPTIN-5
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos RABEP1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo RABAPTIN-5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo RABAPTIN-5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus RABEP1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo RABAPTIN-5 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR RABAPTIN-5 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia RABEP1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo RABEP1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.