Plásmido CRISPR de Activación (h) Rab11-FIP5: sc-407779-ACT

RAB11FIP5 codifica Rab11-FIP5, una proteína interactora de la familia Rab11 que actúa como efector en el tráfico de endosomas de reciclaje dependiente de Rab11. Coordina la clasificación de vesículas y los procesos de reciclaje de membrana que influyen en la renovación de receptores, la endocitosis y el transporte polarizado, configurando así las salidas de señalización en la membrana plasmática. A través de sus funciones en la dinámica endosomal y el reciclaje de carga, Rab11-FIP5 contribuye a la regulación de la migración celular, la adhesión y la organización del citoesqueleto. Las vías de reciclaje desreguladas que implican efectores de Rab11 se han vinculado con alteraciones de la señalización y fenotipos invasivos observados en múltiples modelos relevantes para enfermedades, lo que respalda su utilidad en estudios de mecanismos dependientes del tráfico.

Rab11-FIP5 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RAB11FIP5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Rab11-FIP5 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RAB11FIP5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RAB11FIP5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Rab11-FIP5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RAB11FIP5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Rab11-FIP5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Rab11-FIP5 en células tumorales con expresión de RAB11FIP5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.