R2 Lentiviral Activation Particles (h): sc-400624-LAC

ヒトRRM2は、リボヌクレオチドをデオキシリボヌクレオチドへ変換してDNAの合成と修復を維持する必須酵素であるリボヌクレオチドレダクターゼのR2小サブユニットをコードする。R2はラジカル生成中心を提供し、R1サブユニットと協調して触媒活性を可能にすることで、RRM2量をS期の進行、複製フォークの安定性、ゲノム維持と結び付けている。RRM2発現は、チェックポイント制御や複製ストレス応答を含む細胞周期・DNA損傷シグナル伝達ネットワークによって制御され、dNTPプールの恒常性形成に関与する。RRM2活性の破綻は、がん生物学において、増殖プログラム、DNA修復能、ならびに遺伝毒性ストレスに対する抵抗性機構という文脈でしばしば研究されている。

R2 レンチウイルス活性化粒子（h）は、完全な相乗的活性化メディエーター（SAM）転写活性化システムを、トランスダクション可能な高力価レンチウイルス粒子に封入することでこのニーズに対応し、より広範なヒト細胞タイプにおいて効率的なRRM2の発現上昇を可能にします。

R2 レンチウイルス活性化粒子（h）は、レンチウイルス媒介を介して、シナジー活性化メディエーター（SAM）システムのすべての機能的構成要素を届ける。このシステムは、標的細胞へ共導入される3種類の粒子製剤で構成されています。1つは、VP64転写活性化ドメインとブラスティシジン耐性遺伝子を融合させた、触媒活性のないdCas9（D10AおよびN863A変異）をコードするものです。ヒグロマイシン耐性遺伝子を有するMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードするもの；および、2つのMS2 RNAアプタマーと融合した標的特異的20塩基対sgRNAをコードし、プロマイシン耐性遺伝子を有するもの。レンチウイルスによる導入および発現カセットのゲノムへの組み込み後、SAM構成要素は安定して発現し、RRM2転写開始点の上流にある近位プロモーター領域内の標的座に集合する。そこでは、VP64、p65、およびHSF1が協調して作用し、内因性の転写機構を動員して、内因性R2の発現を持続的に上向きに調節する。ヌクレアーゼ不活性型dCas9を使用することで、二本鎖DNA切断の導入を回避し、天然のRRM2ゲノム座および制御機構を維持します。

レンチウイルス形式には、いくつかの実用的な利点があります。安定したゲノム組み込みにより、細胞分裂を経ても遺伝的に継承される活性化がサポートされます。高力価の粒子調製により、施設内でのウイルス生産の必要性がなくなります。また、初代培養細胞、非増殖性細胞、およびトランスフェクション抵抗性細胞との互換性により、実験の適用範囲が広がります。成功したトランスダクションは、プロマイシン、ハイグロマイシン、ブラスティシジンを用いた三重抗生物質選別により確認および選別が可能である。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。