QIP1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-405442-LAC

KPNA4 codifica la carioferina alfa 4 (QIP1), un adattatore della famiglia importin-α che riconosce i segnali classici di localizzazione nucleare e si associa a importin-β per mediare l’importazione nucleare dipendente da RanGTP. Attraverso il controllo del traffico nucleo-citoplasmatico, KPNA4 influenza la disponibilità nucleare di fattori di trascrizione, proteine di riparazione del DNA e regolatori del ciclo cellulare, modellando così i programmi di espressione genica e le risposte allo stress. Alterazioni del trasporto mediato da importin-α sono state collegate a proliferazione disregolata, segnalazione infiammatoria e fenotipi oncogenici, rendendo KPNA4 un nodo utile per studiare le dipendenze dal trasporto nucleare. KPNA4/QIP1 è quindi rilevante per ricerche sull’accoppiamento tra segnalazione e trascrizione, sui processi associati alla cromatina e sui cambiamenti, legati alla malattia, nella dinamica dell’importazione nucleare.

Le particelle di attivazione lentivirale QIP1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di KPNA4 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale QIP1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione KPNA4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di QIP1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo KPNA4 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.