Partículas Lentivirales de Activación (h) QIP1: sc-405442-LAC

KPNA4 codifica la carioferina alfa 4 (QIP1), un adaptador de la familia de las importinas-α que reconoce señales clásicas de localización nuclear y se asocia con la importina-β para mediar la importación nuclear dependiente de RanGTP. Al controlar el tráfico nucleocitoplasmático, KPNA4 influye en la disponibilidad nuclear de factores de transcripción, proteínas de reparación del ADN y reguladores del ciclo celular, moldeando así los programas de expresión génica y las respuestas al estrés. La alteración del transporte mediado por importina-α se ha vinculado con proliferación desregulada, señalización inflamatoria y fenotipos oncogénicos, lo que convierte a KPNA4 en un nodo útil para estudiar dependencias del transporte nuclear. Por ello, KPNA4/QIP1 es relevante para investigaciones sobre el acoplamiento entre señalización y transcripción, procesos asociados a la cromatina y cambios en la dinámica de importación nuclear relacionados con enfermedades.

Las partículas de activación lentiviral QIP1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de KPNA4 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral QIP1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción KPNA4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de QIP1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo KPNA4 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.