PYGL CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-430989

概要

マウスのPyglは、肝臓のグリコーゲンホスホリラーゼ（PYGL）をコードしており、グリコーゲンを動員する律速酵素です。PYGLは、リン酸分解反応によってグリコーゲンを切断し、下流の解糖系やグルコース恒常性に用いられるグルコース-1-リン酸を生成します。PYGL活性は、ホルモンシグナルや栄養感知からの入力と連動して肝臓のグリコーゲン分解を調節し、炭水化物の利用可能性を中心炭素代謝経路における代謝フラックスへと結び付けます。PYGL機能の撹乱は、グリコーゲンの貯蔵および利用を変化させ、先天性のグリコーゲン代謝異常とも関連するため、肝細胞および個体モデルにおける代謝適応やエネルギーバランスを研究する上で有用な標的となります。そのためPyglは、肝臓の代謝プログラミング、絶食応答、ならびにグルコース代謝のシステムレベルでの制御に関する研究に広く有益な情報を提供します。

PYGL CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPygl遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Pygl内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Pyglのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PYGLタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PYGLシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Pygl欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PYGLの機能に不可欠なPyglエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Pyglゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PYGL CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびPYGL CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Pygl遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PYGL HDRプラスミド（m）および PYGL HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPyglホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPygl標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。