Plásmido CRISPR de Activación (h) PYGL: sc-401950-ACT

El gen humano **PYGL** codifica la isoforma hepática de la glucógeno fosforilasa, una enzima citosólica clave que cataliza la escisión fosforolítica del glucógeno para generar glucosa-1-fosfato, destinada a la glucólisis posterior y al mantenimiento de la homeostasis sistémica de la glucosa. La actividad de PYGL integra señales hormonales y de nutrientes con la glucogenólisis y el metabolismo de los carbohidratos en un sentido más amplio, contribuyendo al equilibrio energético celular durante el ayuno y el estrés metabólico. La desregulación de la degradación del glucógeno hepático se asocia con errores congénitos del metabolismo del glucógeno y puede influir en fenotipos metabólicos relacionados con la resistencia a la insulina y la función hepática. Como nodo de vía que conecta el almacenamiento de glucógeno con el metabolismo central del carbono, PYGL se estudia ampliamente en biología hepática, regulación del flujo metabólico y redes de detección de energía.

PYGL El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PYGL sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PYGL El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PYGL en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PYGL, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PYGL. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PYGL y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PYGL en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PYGL en células tumorales con expresión de PYGL silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.