Plásmido CRISPR de Activación (h) PYGB: sc-406294-ACT

El gen humano **PYGB** codifica la isoforma cerebral de la glucógeno fosforilasa, una enzima limitante de la velocidad que cataliza la degradación del glucógeno para generar glucosa-1-fosfato y sostener el suministro de energía celular. Al vincular la movilización de glucógeno con la glucólisis y el metabolismo de carbohidratos en general, PYGB favorece la flexibilidad metabólica cuando fluctúa la disponibilidad de nutrientes u oxígeno. La actividad de PYGB se integra con redes de señalización que ajustan la homeostasis energética, incluida la detección de AMP/ATP y vías sensibles al estrés que influyen en la supervivencia y la proliferación celular. Se ha observado una desregulación del metabolismo del glucógeno y una expresión alterada de PYGB en contextos de adaptación metabólica y de reprogramación del uso de energía asociada al cáncer, lo que lo convierte en una diana útil para estudios mecanísticos de la bioenergética.

PYGB El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PYGB sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PYGB El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PYGB en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PYGB, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PYGB. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PYGB y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PYGB en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PYGB en células tumorales con expresión de PYGB silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.