Pumilio 1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406309

Descripción general

PUM1 codifica Pumilio 1, una proteína conservada de unión a ARN que reconoce elementos de respuesta a Pumilio en las regiones 3′ UTR para regular la estabilidad, la localización y la traducción del ARNm. Al ensamblar complejos reguladores posranscripcionales, PUM1 configura programas de expresión génica que controlan la progresión del ciclo celular, la diferenciación y la remodelación del transcriptoma en respuesta al estrés. Pumilio 1 participa en vías del metabolismo del ARN, incluida la represión de la traducción, la degradación del ARNm y la coordinación con la regulación mediada por microARN. La actividad desregulada de PUM1 se ha vinculado con alteraciones en la proteostasis y en programas de mantenimiento del genoma, y se ha estudiado en el contexto de fenotipos del neurodesarrollo y neurodegenerativos, así como de redes de regulación del ARN asociadas al cáncer.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Pumilio 1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PUM1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PUM1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PUM1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Pumilio 1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PUM1 para la investigación de la señalización de Pumilio 1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PUM1 críticos para la función de Pumilio 1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PUM1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Pumilio 1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Pumilio 1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PUM1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Pumilio 1 (h) y el plásmido HDR Pumilio 1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PUM1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PUM1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.