Plásmido CRISPR de Activación (h) Ptx3: sc-402766-ACT

PTX3 codifica la pentraxina 3 (Ptx3), una molécula soluble de reconocimiento de patrones de la familia de las pentraxinas largas que participa en la inmunidad innata y en la regulación de la matriz extracelular. Ptx3 se induce rápidamente por señales inflamatorias como IL‑1, TNF y productos microbianos, y contribuye al control de la activación del complemento, la opsonización y la modulación del reclutamiento de leucocitos en el marco de respuestas impulsadas por NF‑κB y citocinas. También participa en la remodelación tisular al unirse a componentes de la matriz y a factores de crecimiento, vinculando la señalización inflamatoria con la angiogénesis y la organización del estroma. La expresión desregulada de PTX3 se asocia con estados inflamatorios crónicos, la biología de las infecciones, la inflamación cardiovascular y metabólica, y la dinámica del microambiente asociado a tumores, lo que respalda su uso como lectura funcional en estudios de inmunología y modelos de enfermedad.

Ptx3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PTX3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Ptx3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PTX3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PTX3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Ptx3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PTX3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Ptx3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Ptx3 en células tumorales con expresión de PTX3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.