Plásmido Doble Nickase (h) PTP1B: sc-400732-NIC

PTPN1 codifica la proteína tirosina fosfatasa 1B (PTP1B), una fosfatasa asociada al retículo endoplásmico que desfosforila quinasas de tirosina receptoras activadas y proteínas adaptadoras clave. Al atenuar la señalización del receptor de insulina y del receptor de leptina, y al modular las salidas de las vías JAK/STAT, MAPK/ERK y PI3K/AKT, PTP1B ayuda a regular el metabolismo celular, la respuesta a factores de crecimiento y la señalización inflamatoria. La actividad alterada de PTPN1/PTP1B se ha relacionado con una homeostasis de la glucosa y una adiposidad desreguladas, y se estudia con frecuencia en el contexto de redes de señalización oncogénicas impulsadas por una fosforilación de tirosina aberrante. En los compartimentos inmunitario y estromal, PTP1B también moldea la dinámica de la señalización de citocinas, lo que la hace relevante para estudios de respuestas al estrés celular y de crosstalk entre vías de señalización.

PTP1B El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PTPN1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PTPN1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PTPN1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PTPN1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.