Plásmido CRISPR de Activación (h) PTEN: sc-400103-ACT

PTEN codifica una fosfatasa de lípidos y proteínas que contrarresta la señalización de PI3K al desfosforilar PIP3, limitando así la activación de AKT y los programas de crecimiento dependientes de mTOR aguas abajo. Mediante esta actividad, PTEN regula la progresión del ciclo celular, el metabolismo, la supervivencia y la migración, y contribuye al mantenimiento de la estabilidad genómica y la homeostasis tisular. La función de PTEN se integra con vías que controlan la polaridad epitelial y la dinámica del citoesqueleto, influyendo en la adhesión y el comportamiento invasivo. La desregulación de la expresión o la actividad de PTEN se asocia con frecuencia con señalización oncogénica y con procesos inmunitarios y del desarrollo alterados, lo que lo convierte en un nodo ampliamente utilizado para estudios mecanísticos de reconfiguración de vías.

PTEN El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PTEN sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PTEN El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PTEN en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PTEN, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PTEN. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PTEN y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PTEN en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PTEN en células tumorales con expresión de PTEN silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.