PSGL-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422874

Übersicht

Selplg kodiert den P‑Selektin‑Glykoproteinliganden‑1 (PSGL‑1), ein mucinartiges Sialomucin, das auf Leukozyten exprimiert wird und an Selektine bindet, um das Anheften, Rollen und die feste Adhäsion an aktiviertem Endothel und an Thrombozyten zu vermitteln. Durch regulierte Glykosylierung und Tyrosinsulfatierung integriert PSGL‑1 Adhäsions- und chemokinvermittelte Signale, um den Leukozytenverkehr, die Extravasation und die Bildung immunologischer Synapsen zu koordinieren. PSGL‑1 ist an Entzündungskaskaden beteiligt, indem es die Rekrutierung von Neutrophilen, Monozyten‑Endothel‑Interaktionen und Thrombozyten‑Leukozyten‑Aggregate mitprägt und so vaskuläre Entzündung mit Immunaktivierung verknüpft. Eine dysregulierte SELPLG/PSGL‑1‑Funktion wurde mit veränderter Wirtsabwehr und entzündlicher Pathologie in Verbindung gebracht, was es zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien zur Leukozytenmigration und zu immunothrombosebezogenen Prozessen macht.

Das PSGL-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Selplg-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Selplg-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Selplg nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PSGL-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Selplg-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PSGL-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Selplg-Exone abzielen, die für die PSGL-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Selplg-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PSGL-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom PSGL-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Selplg-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PSGL-1 HDR-Plasmid (m) und PSGL-1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Selplg-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Selplg-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.