PSAT1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403001-ACT

O PSAT1 humano codifica a fosfoserina aminotransferase 1, uma enzima dependente de fosfato de piridoxal que catalisa a conversão de 3-fosfohidroxipiruvato em 3-fosfoserina na via de biossíntese de novo de L-serina. Ao sustentar a disponibilidade de serina e glicina, o PSAT1 contribui para o metabolismo de um carbono, a biossíntese de nucleotídeos, a homeostase redox e a função mitocondrial, conectando o metabolismo central do carbono à capacidade proliferativa. A regulação de PSAT1 é frequentemente estudada no contexto de respostas ao estresse por aminoácidos mediadas por ATF4 e da sinalização integrada de estresse, com efeitos a jusante sobre programas de crescimento anabólico. A expressão desregulada de PSAT1 tem sido associada à reprogramação metabólica observada em múltiplos modelos celulares relevantes para doenças, incluindo o metabolismo do câncer e fenótipos do neurodesenvolvimento.

PSAT1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PSAT1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PSAT1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PSAT1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PSAT1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PSAT1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PSAT1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PSAT1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PSAT1 em células tumorais com expressão de PSAT1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.