PRX VI Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401549-ACT

PRDX6 codifica la perossiredossina VI (PRX VI), un enzima antiossidante bifunzionale con attività glutatione perossidasica e attività fosfolipasi A2 indipendente dal calcio, che contribuisce alla detossificazione del perossido di idrogeno e alla riparazione dei fosfolipidi di membrana ossidati. Regolando l’equilibrio redox e il turnover dei fosfolipidi, PRX VI influenza le risposte cellulari allo stress ossidativo, alla perossidazione lipidica e alla segnalazione infiammatoria, intersecandosi con vie che modulano l’apoptosi, la proteostasi e la funzione mitocondriale. Alterazioni dell’espressione di PRDX6 e dell’attività di PRX VI sono state associate a disfunzioni del controllo redox nella biologia del cancro, a disturbi metabolici e cardiovascolari e a processi neurodegenerativi, in cui il danno ossidativo e il danno di membrana sono caratteristiche rilevanti.

PRX VI Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PRDX6 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PRX VI Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PRDX6 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PRDX6, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PRX VI. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PRDX6 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PRX VI nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PRX VI nelle cellule tumorali con espressione di PRDX6 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.