Plásmido Doble Nickase (h) PRX III: sc-401730-NIC

PRDX3 codifica la peroxirredoxina III (PRX III), una peroxidasa dependiente de tioredoxina localizada en la mitocondria que reduce el peróxido de hidrógeno y los hidroperóxidos orgánicos para mantener la homeostasis redox. Al controlar los niveles mitocondriales de especies reactivas de oxígeno (ROS), PRX III influye en la eficiencia de la fosforilación oxidativa, la permeabilidad mitocondrial y las vías de señalización sensibles al estado redox, incluidas la apoptosis y las redes de respuesta al estrés. La actividad de PRDX3 se ha vinculado a la adaptación celular a la hipoxia y a la reprogramación metabólica, y la alteración de su expresión se ha asociado con fenotipos de estrés oxidativo observados en diversos tipos de cáncer, así como en contextos neurodegenerativos e inflamatorios. Como nodo antioxidante mitocondrial, PRX III se estudia con frecuencia por su impacto en la estabilidad del genoma, la proteostasis y la modulación, impulsada por ROS, de la actividad de quinasas y factores de transcripción.

PRX III El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PRDX3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PRDX3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PRDX3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PRDX3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.