PRRG1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-436837

Descripción general

El gen Prrg1 de ratón codifica PRRG1, una proteína transmembrana rica en prolina con un dominio de γ-carboxiglutamato (Gla) que sugiere funciones en interacciones proteicas dependientes de calcio en la superficie celular. PRRG1 está implicada en la señalización asociada a la adhesión y en procesos reguladores próximos a la membrana que pueden influir en la organización del citoesqueleto, el tráfico de receptores y la comunicación entre la matriz extracelular y las vías intracelulares. Los patrones de expresión y las asociaciones descritas vinculan PRRG1 con programas de diferenciación celular y la homeostasis específica de tejidos, lo que la hace relevante para estudios de alteraciones de la señalización en contextos del desarrollo y relacionados con enfermedades. Desentrañar la función de PRRG1 puede ayudar a aclarar cómo las proteínas con dominio Gla modulan microambientes locales de señalización y las respuestas transcripcionales posteriores.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PRRG1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Prrg1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Prrg1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Prrg1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PRRG1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Prrg1 para la investigación de la señalización de PRRG1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Prrg1 críticos para la función de PRRG1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Prrg1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PRRG1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido PRRG1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Prrg1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PRRG1 (m) y el plásmido HDR PRRG1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Prrg1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Prrg1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.