Partículas Lentivirales de Activación (h2) PRP4 kinase: sc-411224-LAC-2

El gen humano PRPF4B codifica la quinasa PRP4, una proteína quinasa de serina/treonina que se asocia con el tri-snRNP U4/U6·U5 y regula el empalme del pre-ARNm al fosforilar componentes del espliceosoma, favoreciendo el ensamblaje del espliceosoma y su activación catalítica. Mediante el control de la selección de sitios de empalme y de la maduración de los transcritos, la quinasa PRP4 vincula el procesamiento nuclear de ARN con la progresión del ciclo celular y con programas de señalización sensibles al estrés que dependen de una expresión génica coordinada. La desregulación de la expresión o la actividad de PRPF4B se ha relacionado con patrones de empalme aberrantes observados en el cáncer y en otros trastornos con procesamiento de ARN alterado, lo que la hace relevante para estudios de remodelación del transcriptoma y diversidad del proteoma. La edición génica de PRPF4B en células humanas permite investigar de forma mecanística la dinámica del espliceosoma, la fosforregulación de los factores de empalme y los efectos posteriores sobre el empalme alternativo, las respuestas al daño del ADN y los fenotipos celulares en flujos de trabajo de genómica funcional.

Las partículas de activación lentiviral PRP4 kinase (h2) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de PRPF4B en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral PRP4 kinase (h2) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción PRPF4B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de PRP4 kinase. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo PRPF4B y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.