Protamine 1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402496-ACT

PRM1 codifica a protamina 1, uma proteína nuclear altamente rica em arginina que substitui as histonas durante a fase final da espermiogênese, promovendo uma compactação extrema da cromatina em espermátides haploides. Essa transição é central para a condensação da cabeça do espermatozoide, a estabilização do genoma e o empacotamento adequado do DNA paterno, e é coordenada com eventos de remodelamento da cromatina, reparo de DNA e reprogramação epigenética na linhagem germinativa masculina. A expressão alterada de PRM1 ou o desequilíbrio de protaminas está associado a estrutura anormal da cromatina espermática, aumento da fragmentação do DNA e comprometimento da função espermática em estudos sobre infertilidade por fator masculino. Como componente de cromatina restrito a células germinativas, PRM1 também é usado como marcador para investigar programas de maturação espermática e a regulação da transcrição específica de espermátides.

Protamine 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PRM1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Protamine 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PRM1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PRM1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Protamine 1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PRM1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Protamine 1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Protamine 1 em células tumorais com expressão de PRM1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.