Plasmide CRISPR d'Activation (h) Prohibitin: sc-416271-ACT

Le gène humain **PHB** code la **prohibitine**, une protéine d’échafaudage conservée qui se localise principalement à la membrane interne mitochondriale et coordonne la stabilité des composants de la chaîne respiratoire avec le contrôle qualité des protéines mitochondriales. La prohibitine participe à la régulation de la morphologie mitochondriale, du potentiel de membrane et de la mitophagie, reliant l’état fonctionnel de l’organite à la progression du cycle cellulaire, à l’apoptose et aux réponses au stress cellulaire. Par ses interactions avec des nœuds de signalisation tels que **MAPK** et **PI3K/AKT**, ainsi que par la modulation de programmes transcriptionnels, **PHB** influence la prolifération et la différenciation dans de nombreux types cellulaires. Une expression ou une fonction dérégulée de **PHB** a été associée à des altérations de l’homéostasie métabolique et de la biologie tumorale, ce qui en fait un marqueur largement utilisé et un point d’entrée mécanistique pour l’étude de la signalisation mitochondriale et des voies oncogéniques.

Prohibitin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PHB sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Prohibitin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PHB dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PHB, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Prohibitin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PHB natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Prohibitin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Prohibitin dans les cellules tumorales présentant une expression de PHB silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.