PRH2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406292

Übersicht

PRH2 (prolinreiches Protein, HaeIII-Unterfamilie 2) kodiert ein sezerniertes, prolinreiches Speichelprotein, das vor allem in den Speicheldrüsen exprimiert und in die Mundhöhle abgegeben wird. Von PRH2 abgeleitete Proteine tragen zur Zusammensetzung und zu den physikochemischen Eigenschaften des Speichels bei und unterstützen die Gleitfähigkeit, die Bildung der Schmelz-Pellikula sowie Interaktionen mit Nahrungsbestandteilen und der oralen Mikrobiota. Variationen prolinreicher Speichelproteine wurden im Kontext von Wirt–Mikroben-Interaktionen, oraler Ökologie und der Anfälligkeit für orale entzündliche Erkrankungen untersucht, wobei die Bindung von Proteinen an Oberflächen und die mikrobielle Adhäsion lokale Immun- und Barriereprozesse beeinflussen können. Als stark exprimierter sekretierter Faktor in einem gewebespezifischen Kontext bietet PRH2 ein nützliches Modell, um die Regulation sekretorischer Gene und Proteinfunktionen in oralen Epithel- und Drüsensystemen zu untersuchen.

Das PRH2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PRH2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PRH2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PRH2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PRH2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PRH2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PRH2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PRH2-Exone abzielen, die für die PRH2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PRH2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PRH2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PRH2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PRH2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PRH2 HDR-Plasmid (h) und PRH2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PRH2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PRH2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.