Presenilin 1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-422445-ACT

O gene Psen1 de camundongo codifica a presenilina 1, o núcleo catalítico do complexo γ-secretase, responsável pela proteólise intramembranar de múltiplas proteínas de membrana do tipo I. Por meio da clivagem regulada de substratos como a APP e os receptores Notch, a presenilina 1 ajuda a coordenar a sinalização de Notch, o desenvolvimento neuronal e a manutenção sináptica, além da renovação mais ampla de proteínas de membrana em vias de tráfego endossomal–lisossomal. A atividade de Psen1 influencia processos celulares, incluindo diferenciação, homeostase de cálcio e respostas ao estresse ligadas à proteostase. A desregulação da função da γ-secretase dependente de presenilina 1 é amplamente utilizada para modelar mecanismos relevantes para a neurodegeneração e fenótipos associados ao Notch na pesquisa biomédica.

Presenilin 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Psen1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Presenilin 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Psen1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Psen1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Presenilin 1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Psen1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Presenilin 1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Presenilin 1 em células tumorais com expressão de Psen1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.