prefoldin 4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-416619-ACT

PFDN4 codifica a prefoldina 4, uma subunidade do complexo co-chaperona prefoldina, que captura polipeptídeos nascentes ou desdobrados e os encaminha para a chaperonina TRiC/CCT para um dobramento adequado. Essa atividade sustenta a proteostase do citoesqueleto ao facilitar a maturação de actina e tubulina e ajuda a manter a homeostase proteica sob estresse celular. Por meio do seu papel no dobramento mediado por chaperonas, PFDN4 contribui para vias que regulam a progressão do ciclo celular, redes de proteostase e sinalização de resposta ao estresse. A função de chaperonas desregulada e a atividade alterada do complexo prefoldina têm sido associadas ao desequilíbrio de proteostase observado em contextos de pesquisa sobre câncer e neurodegeneração.

prefoldin 4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PFDN4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

prefoldin 4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PFDN4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PFDN4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de prefoldin 4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PFDN4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de prefoldin 4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via prefoldin 4 em células tumorais com expressão de PFDN4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.