Plásmido CRISPR de Activación (h) Prealbumin: sc-401083-ACT

El TTR humano codifica la prealbúmina (transtiretina), un homotetrámero secretado que transporta tiroxina (T4) y retinol mediante su interacción con la proteína fijadora de retinol, apoyando la distribución de hormonas endocrinas y la homeostasis de la vitamina A. El TTR se produce predominantemente en los hepatocitos y en el epitelio del plexo coroideo, y contribuye al transporte de proteínas en el plasma y el líquido cefalorraquídeo. Las alteraciones en la expresión, el plegamiento o la estabilidad del tetrámero de TTR se asocian con la agregación extracelular de proteínas y la disfunción tisular, lo que lo convierte en un modelo ampliamente utilizado para estudiar la proteostasis, la secreción y la biología del amiloide. La regulación de TTR también es informativa para los programas transcripcionales hepáticos y las vías sensibles al estrés que influyen en el control de calidad de las proteínas secretadas.

Prealbumin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TTR sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Prealbumin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TTR en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TTR, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Prealbumin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TTR y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Prealbumin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Prealbumin en células tumorales con expresión de TTR silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.