PRDM6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-406414-ACT

PRDM6 codifica um regulador transcricional contendo domínio PR/SET que modula o estado da cromatina e programas de expressão gênica ligados à especificação da linhagem de músculo liso e à homeostase vascular. Ao influenciar a repressão epigenética e redes transcricionais associadas à diferenciação, PRDM6 ajuda a coordenar a progressão do ciclo celular e a mudança fenotípica em células do tipo músculo liso. A atividade desregulada de PRDM6 tem sido associada a fenótipos de desenvolvimento e remodelamento vascular alterados, tornando-o relevante para estudos de biologia cardiovascular e de contextos de sinalização proliferativa. Sua função regulatória nuclear posiciona PRDM6 como um nó útil para dissecar o controle, dependente de cromatina, da linhagem e da transcrição responsiva ao estresse.

PRDM6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PRDM6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PRDM6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PRDM6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PRDM6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PRDM6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PRDM6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PRDM6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PRDM6 em células tumorais com expressão de PRDM6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.