Partículas Lentivirales de Activación (h) PRDM16: sc-403464-LAC

PRDM16 codifica un regulador transcripcional que contiene un dominio PR/SET y que coordina la especificación de linaje y los programas génicos metabólicos mediante activación y represión transcripcional dependientes del contexto. En linajes adiposos y mesenquimales, PRDM16 está estrechamente vinculado a la biogénesis mitocondrial, el metabolismo oxidativo y las redes génicas termogénicas a través de interacciones con cofactores como miembros de la familia PGC-1 y complejos modificadores de cromatina. En el sistema hematopoyético, PRDM16 contribuye al mantenimiento y la diferenciación de células madre/progenitoras, lo que refleja funciones más amplias en el control del estado de la cromatina y en los circuitos transcripcionales del desarrollo. La expresión desregulada de PRDM16 o sus alteraciones estructurales se han asociado con una diferenciación aberrante y con programas transcripcionales oncogénicos, lo que respalda su estudio en biología del cáncer, metabolismo y regulación del desarrollo.

Las partículas de activación lentiviral PRDM16 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de PRDM16 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral PRDM16 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción PRDM16, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de PRDM16. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo PRDM16 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.