PRDM11 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-417861-ACT

PRDM11 kodiert ein Zinkfingerprotein mit PR/SET-Domäne, das an der chromatinassoziierten Regulation der Transkription sowie an linienspezifischen Genexpressionsprogrammen beteiligt ist. Als Mitglied der PRDM-Familie ist PRDM11 mit epigenetischen Kontrollmechanismen verknüpft, die Zellzustandsübergänge koordinieren, darunter Differenzierung und die Aufrechterhaltung der zellulären Identität. Eine Dysregulation von Transkriptionsregulatoren der PRDM-Familie wurde mit veränderten Entwicklungswegen und aberranten Genexpressionsnetzwerken bei Krebs und anderen Erkrankungen in Verbindung gebracht, was die Untersuchung PRDM11-abhängiger transkriptioneller Schaltkreise motiviert. Die Erforschung der PRDM11-Funktion unterstützt mechanistische Arbeiten zur Chromatin-Remodellierung, zur Rekrutierung von Transkriptionsfaktoren und zur kontextabhängigen Kontrolle nachgeschalteter Zielgene.

PRDM11 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PRDM11-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

PRDM11 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PRDM11-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PRDM11-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PRDM11-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PRDM11-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PRDM11-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PRDM11-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PRDM11-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.