PPPDE1 Plasmide Double Nickase (h): sc-412095-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PPPDE1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PPPDE1 Double Nickase Plasmid (h) e il PPPDE1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DESI2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PPPDE1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-412095-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PPPDE1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-412095-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PPPDE1 (noto anche come DESI2) codifica una proteina contenente un dominio PPPDE implicata nella biologia dei modificatori ubiquitina-simili, con attività riportate di tipo deSUMOilasi/deubiquitinasi che possono influenzare la stabilità proteica e l’output dei segnali intracellulari. Modulando gli stati di modificazione post-traduzionale, PPPDE1 è in grado di influenzare processi quali la proteostasi, le risposte allo stress cellulare e il turnover proteico regolato. Alterazioni della dinamica delle vie SUMO/ubiquitina sono frequentemente associate a un controllo della crescita e a un mantenimento del genoma deregolati, rendendo PPPDE1 un bersaglio utile per studi meccanicistici in modelli cellulari rilevanti per la patologia. L’analisi della funzione di PPPDE1 può aiutare a chiarire come l’elaborazione dei modificatori si interfacci con la regolazione trascrizionale e con altre reti di segnalazione.
PPPDE1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DESI2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DESI2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DESI2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DESI2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.