Plasmide CRISPR/Cas9 KO PP2Cκ (m): sc-433975

Présentation

Le gène murin *Ppm1k* code la phosphatase protéique mitochondriale PP2Cκ, une phosphatase sérine/thréonine dépendante du Mg2+/Mn2+ qui régule le catabolisme des acides aminés à chaîne ramifiée (BCAA) en déphosphorylant le complexe déshydrogénase des α-cétoacides à chaîne ramifiée (BCKDH). En contrôlant l’activité de BCKDH, PP2Cκ influence les flux nutritionnels mitochondriaux, l’homéostasie énergétique et la signalisation métabolique liée à la disponibilité en acides aminés. Une altération de la fonction de *Ppm1k* a été associée à des niveaux de BCAA modifiés et à un stress métabolique mitochondrial, ce qui en fait un gène pertinent pour l’étude des erreurs innées du métabolisme et de phénotypes métaboliques plus larges où la gestion des BCAA est perturbée.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PP2Cκ (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ppm1k dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ppm1k, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ppm1k à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PP2Cκ.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ppm1k pour l'étude de la signalisation de PP2Cκ, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ppm1k essentiels à la fonction de PP2Cκ
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ppm1k pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PP2Cκ plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le PP2Cκ plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ppm1k. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PP2Cκ plasmide HDR (m) et le PP2Cκ (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ppm1k pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ppm1k définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.