Plasmide CRISPR/Cas9 KO PP2B-Aγ (m): sc-422385

Présentation

Ppp3cc code la sous-unité catalytique gamma de la calcineurine (PP2B-Aγ), une phosphatase sérine/thréonine dépendante du Ca2+/calmoduline qui couple les signaux calciques intracellulaires à des programmes de déphosphorylation contrôlant la transcription et la dynamique du cytosquelette. PP2B-Aγ contribue à des réseaux de signalisation dépendants du calcium tels que la régulation de NFAT, le remodelage associé à l’activité synaptique et l’expression génique dépendante des stimuli dans divers types cellulaires excitables et liés au système immunitaire. En modulant les états de phosphorylation d’intermédiaires clés de signalisation, la calcineurine influence notamment la plasticité neuronale, le développement et les transitions d’état cellulaire. Une activité dérégulée de la voie de la calcineurine est largement étudiée en neurobiologie et en signalisation immunitaire, offrant des cadres pertinents sur le plan pathologique pour des études mécanistiques du contrôle transcriptionnel induit par le calcium.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PP2B-Aγ (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ppp3cc dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ppp3cc, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ppp3cc à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PP2B-Aγ.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ppp3cc pour l'étude de la signalisation de PP2B-Aγ, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ppp3cc essentiels à la fonction de PP2B-Aγ
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ppp3cc pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PP2B-Aγ plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le PP2B-Aγ plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ppp3cc. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PP2B-Aγ plasmide HDR (m) et le PP2B-Aγ (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ppp3cc pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ppp3cc définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.