PP2A-Aβ Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-428621

Descripción general

Ppp2r1b codifica la subunidad de andamiaje PP2A-Aβ de la fosfatasa de proteínas 2A, un complejo fosfatasa central de serina/treonina que organiza las subunidades catalíticas y reguladoras para controlar la especificidad de sustrato y la localización. La señalización de PP2A moldea procesos dependientes de la fosforilación, como la progresión del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN, la dinámica del citoesqueleto y la modulación de las vías MAPK/AKT. Al ajustar los eventos de desfosforilación a través de múltiples redes, PP2A-Aβ influye en la homeostasis celular y la adaptación al estrés en diversos tejidos. La desregulación de subunidades de PP2A, incluidas las componentes de andamiaje, se ha relacionado con alteraciones de la señalización proliferativa y de la estabilidad genómica, lo que respalda su relevancia en estudios mecanísticos de estados de señalización asociados a enfermedades.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PP2A-Aβ (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ppp2r1b en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ppp2r1b junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ppp2r1b tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PP2A-Aβ.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ppp2r1b para la investigación de la señalización de PP2A-Aβ, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Ppp2r1b críticos para la función de PP2A-Aβ
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ppp2r1b para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PP2A-Aβ CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido PP2A-Aβ CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ppp2r1b. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PP2A-Aβ (m) y el plásmido HDR PP2A-Aβ (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ppp2r1b para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ppp2r1b definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.