Plásmido CRISPR de Activación (h) PP2A-Aβ: sc-403081-ACT

PPP2R1B codifica la subunidad de andamiaje PP2A-Aβ, un componente central de los complejos de la fosfatasa proteica 2A que organiza las subunidades catalíticas y reguladoras para coordinar la desfosforilación de serina/treonina. Al moldear el ensamblaje del holoenzima, PP2A-Aβ influye en redes de transducción de señales que controlan la progresión del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN y la dinámica del citoesqueleto, con efectos posteriores sobre los estados de fosforilación asociados a MAPK, AKT y Wnt/β-catenina. La alteración de la función del andamiaje de PP2A puede perturbar el equilibrio de la señalización por fosfatasas y se ha vinculado con proliferación desregulada e inestabilidad genómica en contextos relevantes para el cáncer. Por ello, PPP2R1B se estudia con frecuencia por su papel en el mantenimiento de la homeostasis del fosfoproteoma y el “cross-talk” entre vías en células humanas.

PP2A-Aβ El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PPP2R1B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PP2A-Aβ El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PPP2R1B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PPP2R1B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PP2A-Aβ. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PPP2R1B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PP2A-Aβ en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PP2A-Aβ en células tumorales con expresión de PPP2R1B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.