Particules Lentivirales d'Activation (h) PORCN: sc-413044-LAC

Le gène humain **PORCN** code une O-acyltransférase membranaire du réticulum endoplasmique qui catalyse la palmitoléoylation des ligands **WNT**, une modification requise pour la sécrétion des WNT, l’engagement des récepteurs et la formation de gradients de WNT. En contrôlant la maturation des ligands WNT, PORCN régule la transcription canonique dépendante de la **β-caténine** ainsi que la signalisation WNT non canonique/de **polarité planaire (PCP)**, influençant la prolifération, la différenciation, la polarité et l’organisation des tissus. Une perturbation de la signalisation WNT dépendante de PORCN est impliquée dans des troubles du développement et dans des contextes pathologiques où l’activité de la voie WNT est dérégulée, notamment les cancers et le remodelage fibrotique. En tant que nœud amont limitant le débit dans la production des ligands WNT, PORCN constitue une cible utile pour les études mécanistiques de la sortie de voie et des dynamiques de signalisation paracrine.

Les particules d'activation lentivirales PORCN (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de PORCN dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales PORCN (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription PORCN, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de PORCN. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif PORCN ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.