Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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POL H Double Nickase Plasmid (h): sc-401794-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das POL H Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- POL H Double-Nickase-Plasmid (h) und POL H Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf POLH abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: POL H: sc-17770
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
POL H Double Nickase Plasmid (h) | sc-401794-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
POL H Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401794-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
POLH kodiert die DNA-Polymerase Eta (POL H), eine Translesionssynthese-Polymerase der Y-Familie, die die Replikation über sperrige DNA-Läsionen hinweg ermöglicht – insbesondere über UV-induzierte Cyclobutan-Pyrimidindimere – und dadurch das Stillstehen der Replikationsgabel sowie genomische Instabilität begrenzt. POL H wirkt in Signalwegen der DNA-Schadentoleranz und der Postreplikationsreparatur und koordiniert über PCNA-Ubiquitinierung sowie die RAD6/RAD18-Achse den Wechsel zwischen replizierenden Polymerasen und Läsions-Bypass-Polymerasen. Defekte in POLH stören den präzisen Läsions-Bypass und erhöhen die Mutagenese, was die POLH-Aktivität mit Mechanismen verknüpft, die unter genotoxischem Stress die genomische Integrität beeinflussen. POLH wird daher in Human-Zellsystemen breit zur Erforschung von UV-Antwort, Mutationssignaturen und Replikationsstress untersucht.
POL H Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des POLH-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von POLH abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die POLH-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit POLH-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.