Particules Lentivirales d'Activation (h) POD-1: sc-402890-LAC

TCF21 code le facteur de transcription de type hélice–boucle–hélice POD-1, un régulateur déterminant de lignée qui pilote les programmes de différenciation mésenchymateuse et stromale. POD-1 module des réseaux transcriptionnels gouvernant la signalisation épithélio–mésenchymateuse, le remodelage de la matrice extracellulaire et la morphogenèse des organes, avec des effets en aval sur l’engagement du destin cellulaire et l’expression de gènes spécifiques des tissus. Une activité altérée de TCF21/POD-1 a été associée à une dérégulation des voies développementales et à des modifications de l’état de différenciation, pertinentes pour la fibrose, les interactions tumeur–stroma, ainsi que la biologie cardiovasculaire et rénale. En tant que régulateur transcriptionnel endogène, POD-1 offre un point d’entrée mécanistique pour étudier le contrôle enhancer–promoteur et la fonction des facteurs de transcription dépendante du contexte dans les cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales POD-1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de TCF21 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales POD-1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription TCF21, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de POD-1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif TCF21 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.