PNP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404914

Descripción general

La fosforilasa de nucleósidos de purina (PNP) es una enzima citosólica de la vía de rescate de purinas que cataliza la fosforólisis de los nucleósidos inosina y guanosina para generar hipoxantina o guanina, contribuyendo así a la homeostasis y al reciclaje de nucleótidos. Al controlar el equilibrio de metabolitos de purinas, la PNP influye en el estado energético celular, las condiciones redox y la disponibilidad de precursores de ADN/ARN, con efectos posteriores sobre la proliferación y las respuestas al estrés. La actividad de la PNP es especialmente importante en el metabolismo de las células inmunitarias, donde el flujo de purinas modula la supervivencia y la función de los linfocitos. La desregulación o la deficiencia hereditaria de PNP se asocia con fenotipos de inmunodeficiencia y con una acumulación alterada de metabolitos de purinas, lo que la convierte en una diana relevante para estudios mecanísticos de decisiones de destino celular vinculadas al metabolismo.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PNP (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PNP en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PNP junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PNP tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PNP.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PNP para la investigación de la señalización de PNP, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PNP críticos para la función de PNP
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PNP para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PNP CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PNP CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PNP. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PNP (h) y el plásmido HDR PNP (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PNP para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PNP definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.