PMS1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-418473-ACT

Das humane PMS1 kodiert ein MutL‑Homolog, das an der DNA‑Mismatch‑Reparatur beteiligt ist und die Replikationstreue unterstützt, indem es die Erkennung und Verarbeitung von Basenpaar‑Fehlpaarungen sowie Insertions‑Deletions‑Schleifen koordiniert. PMS1 wirkt innerhalb des MutL‑Komplexnetzwerks, indem es die Mismatch‑Erkennung mit der nachgeschalteten Exzision und Neusynthese koppelt und so zur Genomstabilität sowie zur Unterdrückung spontaner Mutagenese beiträgt. Defekte oder eine veränderte Regulation von Mismatch‑Reparaturgenen können die Mikrosatelliteninstabilität erhöhen und die Anhäufung von Mutationen begünstigen – Prozesse, die allgemein für die Karzinogenese und zelluläre Stressantworten relevant sind. PMS1 wird daher in Signalwegen untersucht, die die DNA‑Schadenssignalgebung, replikationsassoziierte Reparatur und die Aufrechterhaltung der chromosomalen Integrität steuern.

PMS1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PMS1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

PMS1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PMS1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PMS1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PMS1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PMS1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PMS1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PMS1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PMS1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.