PMS1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-418473-ACT

ヒトPMS1は、DNAミスマッチ修復に関与するMutLホモログをコードしており、塩基—塩基ミスマッチや挿入・欠失ループの認識と処理を協調させることで、複製の忠実性を支えています。PMS1はMutL複合体ネットワークの一部として機能し、ミスマッチ認識を下流の切除および再合成へと連結することで、ゲノム安定性の維持と自発的変異誘発の抑制に寄与します。ミスマッチ修復遺伝子の異常や制御の変化は、マイクロサテライト不安定性を高め、変異の蓄積を増加させ得ます。これらの過程は発がんや細胞ストレス応答と広く関連しています。そのためPMS1は、DNA損傷シグナル伝達、複製に伴う修復、染色体の完全性維持を司る経路において研究されています。

PMS1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PMS1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PMS1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PMS1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPMS1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PMS1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPMS1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPMS1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPMS1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPMS1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。