Plásmido Doble Nickase (h) PMCA4: sc-402888-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)PMCA4 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa PMCA4 (h) y el plásmido de doble nickasa PMCA4 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ATP2B4. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) PMCA4 | sc-402888-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) PMCA4 | sc-402888-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATP2B4 codifica la Ca2+-ATPasa 4 de la membrana plasmática (PMCA4), una ATPasa de tipo P que expulsa Ca2+ del citosol para mantener la homeostasis del calcio y modular la amplitud y la duración de la señalización dependiente de Ca2+. PMCA4 regula microdominios localizados de Ca2+ que influyen en procesos como el acoplamiento excitación–contracción, la señalización del óxido nítrico y programas transcripcionales dependientes de Ca2+. Al controlar el aclaramiento de Ca2+ en la membrana plasmática, PMCA4 se integra con vías que incluyen la regulación dependiente de calmodulina y redes posteriores de quinasas/fosfatasas que ajustan la motilidad celular, la secreción y la proliferación. La variación genética o la expresión alterada de ATP2B4 se ha asociado con fenotipos vinculados a la biología de los eritrocitos y a la función vascular, lo que respalda su relevancia en estudios mecanísticos de la fisiología celular impulsada por el calcio.
PMCA4 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ATP2B4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ATP2B4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ATP2B4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ATP2B4 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.