Plásmido CRISPR de Activación (m2) PLP-J: sc-424243-ACT-2

El gen murino Prl3c1 codifica PLP-J, un miembro de la familia de la prolactina, una proteína secretada enriquecida en la placenta e implicada en la biología de la interfaz materno-fetal y en la regulación endocrina durante la gestación. PLP-J se estudia en el contexto de las redes de señalización de prolactina/lactógeno placentario, influyendo en la diferenciación del trofoblasto, la remodelación decidual y el diálogo entre tejidos reproductivos que coordina la implantación y el desarrollo placentario. La desregulación de la expresión de genes de la familia de la prolactina se asocia con una placentación anómala y con fisiopatología relacionada con el embarazo, lo que convierte a Prl3c1 en una diana relevante para estudios mecanísticos de trastornos reproductivos. La edición génica centrada en Prl3c1 y los ensayos funcionales respaldan aplicaciones en modelos murinos para investigar la señalización placentaria, la especificación de linajes y los programas transcriptómicos que controlan la adaptación al embarazo.

PLP-J El plásmido de activación CRISPR (m2) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Prl3c1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PLP-J El plásmido de activación CRISPR (m2) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Prl3c1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Prl3c1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PLP-J. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Prl3c1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PLP-J en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PLP-J en células tumorales con expresión de Prl3c1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.