plexin-B2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-431226

Übersicht

Plxnb2 kodiert Plexin-B2, einen transmembranen Rezeptor für Semaphorine der Klasse 4, der Leitsignale mit der Umgestaltung des Zytoskeletts und der Zellmotilität verknüpft. Die Plexin-B2-Signalübertragung beeinflusst die Aktivität von GTPasen der Rho-Familie und steht in Wechselwirkung mit Rezeptor-Tyrosinkinase-Signalwegen, um während der neuronalen Entwicklung und Gewebeorganisation Adhäsion, Migration und Morphogenese zu koordinieren. In Mausmodellen wird die Funktion von Plxnb2 häufig im Zusammenhang mit Axonleitung, epithelialer Verzweigung sowie der Regulation von Zell-Zell-Interaktionen in sich entwickelnden und adulten Geweben untersucht. Eine fehlregulierte Semaphorin–Plexin-Signalgebung wurde in krankheitsrelevanten Kontexten mit abweichenden Migrations- und Invasionsphänotypen in Verbindung gebracht, was ihre Bedeutung als mechanistischer Knotenpunkt in Signalwegen unterstreicht, die die Gewebearchitektur steuern.

Das plexin-B2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Plxnb2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Plxnb2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Plxnb2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die plexin-B2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Plxnb2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der plexin-B2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Plxnb2-Exone abzielen, die für die plexin-B2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Plxnb2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom plexin-B2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom plexin-B2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Plxnb2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das plexin-B2 HDR-Plasmid (m) und plexin-B2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Plxnb2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Plxnb2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.