Plásmido Doble Nickase (h) PLEKHG5: sc-418543-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)PLEKHG5 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa PLEKHG5 (h) y el plásmido de doble nickasa PLEKHG5 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a PLEKHG5. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PLEKHG5 Anticuerpo (5A9): sc-517108
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) PLEKHG5 | sc-418543-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) PLEKHG5 | sc-418543-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PLEKHG5 codifica un factor de intercambio de nucleótidos de guanina (GEF) para Rho que contiene un dominio de homología a pleckstrina, y que promueve la activación de las GTPasas de la familia Rho, conectando la señalización por fosfoinosítidos con la remodelación del citoesqueleto de actina, el tráfico de membranas y la polaridad celular. Mediante la regulación de vías dependientes de RhoA/CDC42, PLEKHG5 influye en procesos como el crecimiento de neuritas, el transporte vesicular y la señalización en respuesta al estrés. La alteración de la función de PLEKHG5 se ha asociado con fenotipos neuromusculares y neurodegenerativos, en consonancia con su papel en el mantenimiento de las motoneuronas y la homeostasis axonal. Estas características hacen de PLEKHG5 una diana útil para desentrañar la dinámica del citoesqueleto y los mecanismos de señalización en modelos celulares humanos.
PLEKHG5 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PLEKHG5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PLEKHG5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PLEKHG5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PLEKHG5 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.