PISD CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404398

Übersicht

PISD kodiert die Phosphatidylserin-Decarboxylase, ein Enzym der inneren Mitochondrienmembran, das Phosphatidylserin in Phosphatidylethanolamin umwandelt und damit die Membranbiogenese, die Crista-Architektur und die Homöostase des Organells unterstützt. Durch die Kontrolle des PE-Pools beeinflusst PISD das Lipid-Remodeling, die mitochondriale Dynamik sowie Prozesse, die mit oxidativer Phosphorylierung und Apoptose verknüpft sind. Störungen des PISD-abhängigen Phospholipidstoffwechsels wurden mit Defekten der Mitochondrienfunktion und umfassenderen zellulären Stressantworten in Verbindung gebracht, was PISD für Studien zu neuromuskulären und metabolischen Phänotypen relevant macht. Seine zentrale Rolle in der mitochondrialen Lipidbiosynthese überschneidet sich zudem mit Signalwegen, die Autophagie und den Lipidtransport zwischen ER und Mitochondrien regulieren.

Das PISD CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PISD-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PISD-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PISD nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PISD-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PISD-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PISD-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PISD-Exone abzielen, die für die PISD-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PISD-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PISD CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PISD CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PISD-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PISD HDR-Plasmid (h) und PISD HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PISD-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PISD-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.