Particules Lentivirales d'Activation (h) PIPK I α: sc-403490-LAC

PIP5K1A code la phosphatidylinositol-4-phosphate 5-kinase de type I alpha (PIPK I α), une kinase lipidique clé qui génère le phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate (PI(4,5)P2) au niveau de la membrane plasmique et des endomembranes. En contrôlant des réservoirs locaux de PI(4,5)P2, PIPK I α régule le remodelage du cytosquelette d’actine, le trafic membranaire et la signalisation dépendante des phosphoinositides, notamment les voies PI3K–AKT et celles pilotées par la PLC, qui influencent la dynamique du calcium et la production de seconds messagers. L’activité de PIP5K1A soutient des processus tels que la migration cellulaire, l’adhérence et l’endocytose des récepteurs via la modulation des adhésions focales et des réseaux de petites GTPases. Un métabolisme des phosphoinositides dérégulé impliquant PIP5K1A a été associé à des phénotypes prolifératifs et invasifs altérés, et est fréquemment étudié dans le contexte de la biologie du cancer, de la signalisation des cellules immunitaires et de la neurobiologie.

Les particules d'activation lentivirales PIPK I α (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de PIP5K1A dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales PIPK I α (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription PIP5K1A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de PIPK I α. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif PIP5K1A ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.