PIPK I α CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403490

概要

PIP5K1Aは、ホスファチジルイノシトール-4-リン酸 5-キナーゼI型α（PIPK I α）をコードしており、形質膜およびエンドメンブレンでホスファチジルイノシトール 4,5-ビスリン酸（PI(4,5)P2）を産生する主要な脂質キナーゼである。PI(4,5)P2の利用可能性を制御することで、PIPK I αはアクチン細胞骨格のリモデリング、クラスリン介在性エンドサイトーシス、フォーカルアドヒージョンの動態、ならびにPLCやPI3Kなどの下流経路への受容体シグナル伝達の連結を調節する。PIP5K1A依存的なホスホイノシチドシグナル伝達は膜輸送と細胞移動に影響し、これらの過程は腫瘍生物学や浸潤性表現型においてしばしば破綻する。PIP5K1A活性の変化は、増殖因子シグナル伝達の異常や炎症応答の破綻とも関連づけられており、疾患関連の細胞挙動の機序解明研究における重要性を裏づけている。

PIPK I α CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPIP5K1A遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PIP5K1A内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PIP5K1Aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PIPK I αタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PIPK I αシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PIP5K1A欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PIPK I αの機能に不可欠なPIP5K1Aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PIP5K1Aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PIPK I α CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPIPK I α CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PIP5K1A遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PIPK I α HDRプラスミド（h）および PIPK I α HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPIP5K1Aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPIP5K1A標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。